大鼠骨保護素(OPG）ELISA試劑盒實驗原理及操作步驟
發布時間：2022-10-20 點擊次數：164次
大鼠骨保護素(OPG）ELISA試劑盒主要是用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中骨保護素(OPG)含量，應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠骨保護素(OPG)水平。用純化的大鼠骨保護素(OPG)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入骨保護素(OPG)再與HRP標記的骨保護素(OPG)抗體結合，形成抗體抗原酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的骨保護素(OPG)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠骨保護素(OPG)濃度。
操作步驟：
1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔加待測樣本50μL。
3、樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4、除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7、每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
8、結果判斷繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
實驗原理：
大鼠骨保護素(OPG）ELISA試劑盒用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗C3抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。
